抗體是蛋白質(zhì)和分子檢測與純化的強大工具。盡管完整抗體(通常是 IgG 或 IgM)適用于大多數(shù)免疫分析應用,但某些步驟的性能卻通過使用抗體片段(例如 Fab 和 F(ab')2)得到了增強。本文概述了制備抗體片段的優(yōu)勢、類型和方法。
有時,研究或利用免疫球蛋白的部分活性而不受其他分子片段的干擾,是非常有用的。可以選擇性地將免疫球蛋白分子切割成具有離散特征的片段。使用還原劑和蛋白酶消化或切割免疫球蛋白蛋白質(zhì)的部分結構,完成抗體片段化。盡管可以對所有免疫球蛋白類別進行片段化,但只有小鼠、兔和人 IgG 和 IgM 片段化的步驟得到了很好地表征。
兩組主要關注的抗體片段是(a)抗原結合片段(例如 Fab)和(b)不結合抗原的可結晶片段(例如 Fc)??梢缘玫綆追N類型的抗原結合片段,但每種都至少包含重和輕免疫球蛋白鏈(分別為 VH 和 VL)的可變區(qū),通常通過二硫鍵結合在一起以保留抗體結合位點。Fc 片段由免疫球蛋白的重鏈恒定區(qū)(Fc 區(qū))組成,并介導細胞效應功能。
抗體片段化有點費力,需要優(yōu)化酶介導的蛋白質(zhì)消化,并且需要充足的抗體(例如 10 mg)來有效實現(xiàn)。因此,通常僅在可大量獲得目標抗體且特定應用需要時才進行片段化。
抗體 IgG 結構和裂解位點的片段化。常用的抗體片段可通過還原鉸鏈區(qū)二硫化物或通過木瓜蛋白酶、胃蛋白酶或無花果蛋白酶消化來制備,包括半 IgG、Fab、F(ab')2 和 Fc。
抗體片段的優(yōu)點
抗體片段是整個抗體分子中的小型功能元件,與完整抗體相比,抗體片段在某些免疫化學實驗技術和應用中具有多種優(yōu)勢:
①減少了 Fc 相互作用導致的非特異性結合(許多細胞具有結合 Fc 區(qū)的受體)
②在免疫沉淀和蛋白質(zhì)印跡實驗中,控制 Fc 與蛋白 A 或蛋白 G 結合
③更有效地穿透組織切片,改善免疫組織化學(IHC)染色
④減少大蛋白質(zhì)表位的位阻,固相應用中抗原檢測的靈敏度可能更高
⑤消除抗原抗體結合研究中與 Fc 相關的效應功能(例如補體固定)
⑥利用 X 射線晶體學或 NMR 來研究免疫識別結構區(qū),操作更簡便
⑦內(nèi)源實驗時的免疫原性低于完整抗體
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